产品货号:
JN0043
中文名称:
2×Fast Pfu MasterMix
英文名称:
2×Fast Pfu PCR Master Mix
产品规格:
1ml
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是将PCR反应所需的Fast Pfu酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液以及优化剂以及稳定剂,预先配制成2倍浓度的混合物。2×Fast Pfu MasterMix专为扩增克隆DNA片段优化,高保真,错误率仅为1.3×10-6。使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应,非常方便。较普通Pfu酶,2×Fast Pfu Master Mix具有快速、高灵敏度、抗干扰能力强等特点,能获得更理想的扩增结果,并大幅度缩短扩增反应时间,非常适用于1~20kb长片段的扩增。
用于要求保真度比较高,扩增长度较长的PCR反应,包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成等。
- 高保真:具有同Pfu酶相同的保真度,为普通Taq酶的50倍。
- 灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段。
- 快速高效:Fast Pfu扩增速度为普通Pfu酶的数倍,72℃保温30秒可延伸1kb以上,可在较短时间内获得高产量的PCR产物。
- 快捷:PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配制。
组分 | 1mL |
2×Fast Pfu MasterMix | 1mL |
说明书 | 1份 |
保存:-20℃
经检测无外源核酸酶残留;qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留;能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。
Fast Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端,无3'端"A"突出,除使用一步定向克隆试剂盒外,其它PCR产物的克隆方案有:
- PCR前引物进行5'端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中。
- 将产物3'末端加A后再与T载体连接。
- 由于Fast Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3'端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度,理想的引物长度为20-30mers。另外为了减少由3'→5'外切酶活性引起的引物降解,尽量在冰上配制反应体系。
- 需溶解完全后使用,防止离子浓度不均匀。
- 对高GC含量模板,建议将变性温度提高到98℃。
- 对于高GC模板,建议配套使用PCR增强剂III或者添加终浓度为5%~8% DMSO。
- 常用反应体系
注:Mg2+终浓度为2mM。成分 用量 2×Fast Pfu MasterMix 25μL 上游引物 0.2~1.0μM(终浓度) 下游引物 0.2~1.0μM(终浓度) 模板(请根据实际使用
模版进行选择,二选一即可)1~50ng(质粒)
10ng~1μg(基因组)ddH2O 至50μL - 推荐PCR反应程序
- 当扩增片段<3K:
循环数 温度 时间 1 94℃ 90s 30 94℃ 20s 50~60℃ 20s 72℃ 1kb/30s 1 72℃ 5min 1 4℃ 保温
当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp):循环数 温度 时间 1 94℃ 5min 30 94℃ 5s 68℃ 1kb/30s 1 72℃ 5min 1 4℃ 保温
- 当扩增片段<3K:
50μL扩增体系中,λDNA为模板,扩增1kb~20kb片段。
泳道M:λ/Hind III DNAMarker;
泳道1:1kb;泳道2:2kb;
泳道3:4kb;泳道4:6kb;
泳道5:8kb;泳道6:10kb;
泳道7:12kb;泳道8:20kb。
PCR MasterMix选购指南:
编号 | 产品名称 | 特点 |
适用于菌落鉴定、菌液鉴定及常规PCR鉴定实验的Mix系列 | ||
JN0030 | 2×Taq PCR MasterMix | 高性价比PCR Mix,使用简便,扩增灵敏度高 |
JN0034 | 2×Complex Taq PCR MasterMix | JN0030改进版,性能更均衡,适用面更广 |
JN0040 | 2×Fast Taq PCR MasterMix | 最快速的PCR试剂,常规PCR鉴定45分钟内知道结果 |
JN0035 | 2×RoomTop Taq PCR MasterMix | 可放在手边的PCR试剂,室温稳定存放60天 |
JN0036 | 2×RoomTop Fast Taq PCR MasterMix | 室温稳定存放60天,高速PCR试剂,常规PCR鉴定45分钟内知道结果 |
适用于一些较难扩增的PCR条带的鉴定及短片段克隆 | ||
JN0032 | 2×Taq Plus PCR MasterMix | 扩增效率更高及较好的保真度 |
JN0038 | 2×Hot Start Taq PCR MasterMix | 采用热启动Taq,可获得很好的特异性 |
JN0041 | 2×Ultra Taq PCR MasterMix | 高速扩增酶,优化配方,解决PCR扩增难题的,灵敏度高 |
高保真酶试剂,适用于长片段基因克隆 | ||
JN0031 | 2×Pfu PCR MasterMix | 采用高保真酶,适用于基因克隆 |
JN0043 | 2×Fast Pfu PCR MasterMix | 采用改良型高保真酶,更好的扩增效果,4倍扩增速度;扩增迅速 |
防止PCR产物二次污染、极高检测灵敏度的PCR试剂 | ||
JN0047 | 2×PCR MasterMix(防污染) | 采用dUTP/UDG酶系统,从根本上杜绝PCR产物二次污染 |
JN0033 | 2×Genotyping PCR Kit(nomal) | 极高检测灵敏度,可达到普通PCR试剂102至104倍扩增灵敏度 |
PCR MasterMix性能对比表:
名称 | 编号 | 扩增时间 | 扩增长度 | 是否有3'-A | 基因组扩增 |
2×Taq PCR MasterMix | JN0030 | 1min/kb | ≤8kb | √ | + |
2×RoomTop Taq PCR MasterMix | JN0035 | 1min/kb | ≤8kb | √ | ++ |
2×Complex Taq PCR MasterMix | JN0034 | 1min/kb | ≤8kb | √ | + |
2×Fast Taq PCR MasterMix | JN0040 | 15s/kb | ≤8kb | √ | + |
2×RoomTop Fast Taq PCR MasterMix | JN0036 | 15s/kb | ≤8kb | √ | ++ |
2×Ultra Taq PCR MasterMix | JN0041 | 15s/kb | ≤8kb | √ | +++ |
2×Taq Plus PCR MasterMix | JN0032 | 1min/kb | ≤20kb | √ | ++++ |
2×Ultra Taq Plus PCR MasterMix | JN0042 | 15s/kb | ≤30kb | √ | ++++ |
2×Hot Start Taq PCR MasterMix | JN0038 | 1min/kb | ≤8kb | √ | ++++ |
2×Hot Start Taq Plus PCR MasterMix | JN0039 | 1min/kb | ≤20kb | √ | ++++ |
2×Pfu PCR MasterMix | JN0031 | 1min/kb | ≤6kb | × | + |
2×Fast Pfu PCR MasterMix | JN0043 | 30min/kb | ≤12kb | × | + |
2×SYBR Green Realtime PCR MasterMix | JN0049 | 1min/kb | ≤8kb | √ | ++ |
2×Genotyping PCR Kit(Normal) | JN0033 | 1min/kb | ≤8kb | √ | +++++ |
2×Genotyping PCR Kit(Fast) | JN0044 | 15s/kb | ≤8kb | √ | +++++ |
2×PCR MasterMix(防污染) | JN0047 | 1min/kb | ≤8kb | √ | + |
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